專業文章:深度實驗證實冠狀病毒起源來自P4實驗室

重組技術自20世紀80年代開始應用於分子病毒學,2019-NCoV病毒基因組的結構為該病毒的可能來源提供了非常有力的線索。與其他相關冠狀病毒不同,2019-nCoV病毒有一個長約1378 bp(核苷酸鹼基對)的獨特序列,在相關冠狀病毒中沒有發現。從最近發表的使用所有全基因組序列的進化樹來看,我們看到2019-nCoV病毒沒有明確的單系支持,因為bootstrap值為75(圖1)。

關於2019-nCoV的75引導值的特寫,來自Lu等人,2020年《柳葉刀》文章[全文]
毫無疑問,2019-nCoV中存在一個新序列;我們通過序列比對證實了這一點。下面是點圖:

該序列中的空白表明,在最相似的蝙蝠冠狀病毒和2019-nCoV之間缺乏序列同源性。插入的序列,不應該存在於此處:

第一個研究小組對插入序列的起源的全基因組序列進行了數據庫搜索,結果沒有找到結果(Ji等人,2020年)。他們進行了密碼子偏倚分析,由此推測蛇體內的冠狀病毒與蝙蝠冠狀病毒之間可能存在重組事件(Ji等人,2020)。

這導致了對Wired(3)的批評,並引用了駁斥蛇起源假說缺乏證據的話。然而,有明確的證據表明,這一新的序列,我今後將稱之為INS1378,來自實驗室誘導的重組事件,顯然
(1) 與其他冠狀病毒序列的相似性低於其在任何冠狀病毒中最相似的序列(IPAK發現)
(2) INS1378與SARS尖峰蛋白的高序列相似性(2;IPAK證實)。
(3) 我們還發現INS1378與中國80年代用於製造更具免疫原性冠狀病毒的pShuttle SN載體具有顯著的序列相似性(IPAK發現,詳情見下文,選項4)。

在這裡,回顧了從中國武漢的人類患者中分離的2019-nCoV冠狀病毒來源的四種選擇。

選擇1。與蝙蝠冠狀病毒有關的自然冠狀病毒,不是重組病毒。


證據:蝙蝠冠狀病毒的系統發育聚類。


反對證據:低引導支持(N=75)和存在INS1378。
現狀:證偽假設。
試驗:調查野生動物中的冠狀病毒。

選擇2。一種重組病毒,在病毒基因組的N端(3′端)自然地獲得一個類SARS的尖峰蛋白。


證據:INS1378密碼子偏向與蛇相似($)


反對證據:數據庫搜索與其他已知CoV棘突蛋白匹配不足(Ji等人,2020)


現狀:推測性假設。不太可能。


測試:找到一個野生的與2019-nCoV相匹配的分離物,並可重複地從野生動物中獨立分離病毒(匹配將得到確認)。

選擇3。在實驗室中為製造生物武器而製造的重組病毒。


中美雙方都暗示了對方可能承擔的責任,即在實驗室中產生一種新型冠狀病毒,特別是用作生物武器的冠狀病毒。更讓人好奇的是,一名中國科學家因違反協議,涉嫌向中國大陸發送致命病毒樣本,被加拿大馬尼托巴BSL-4實驗室釋放。

1月26日,《華盛頓時報》發表這篇文章,援引一名以色列國防專家的話說,中國很可能已經着手進行生物武器計劃,但文章結尾引用了一位美國科學家羅格斯大學微生物學家理查德•埃布賴特(Richard Ebright)對倫敦《每日郵報》的一句話,即“目前沒有理由對該實驗室可能與病毒爆發有關抱有懷疑”。

2017年2月《自然》雜誌的一篇文章援引了同一個人的話說,非典已經“多次”逃離武漢的設施。

證據:在離武漢海鮮市場20英里的地方有BSL-4實驗室
反對證據:發表的意見。
狀態:謠言。但見下文。

選擇4。一種在實驗室中為製造疫苗而重組的病毒。
IPAK研究人員發現pShuttle SN重組載體序列與INS1378之間存在序列相似性。這是對齊和點圖的快照。

這是NCBI核苷酸數據庫的核苷酸序列。這是一個用於重組病毒學的專利。
pShuttle SN vector是Bert Vogelstein等人在1998年的一篇論文中描述的眾多矢量之一;這裡有一家公司可以購買pShuttle SN vector:

結果表明,pShuttle的序列與SARS冠狀病毒的Spike蛋白關係最為密切。

2008年,這項特殊技術被用於開發一種更具免疫原性的冠狀病毒疫苗。這是用於疫苗的技術和產品的中國專利。
專利摘要如下:


腺病毒載體SARS疫苗及其製備方法、冠狀病毒S基因的應用


摘要(中譯)


本發明屬於基因工程領域,具體涉及SARS(SARS)腺病毒載體疫苗、SARS疫苗的製備和冠狀病毒S基因的預防。通過生物工程的方法,冠狀病毒S基因與缺陷重組腺病毒、其表達的保護性免疫原蛋白或多肽通過膨脹培養、純化、調配製備黏膜免疫原性,可引起基因疫苗的產生,由機體誘導的呼吸道粘膜免疫反應,產生抗病毒感染的抗體。本發明的具體條件與常規滅活病毒顆粒疫苗相比,安全、易用、不受肌肉限制,具有廣泛的臨床應用。

2015年,美國呼籲停止在實驗室中製造新病毒的研究,這些病毒已經增加了威脅(更高的傳染性、更高的致病性、更高的殺傷力)(3)

正是研究SARS疫苗的研究人員一再告誡人們不要進行人體試驗;

“應用SARS-CoV疫苗的早期關注點是其他冠狀病毒感染的經驗,當受到感染病毒的攻擊時,冠狀病毒感染會導致動物的疾病和免疫病理學增強[31],報告強調了一個關注點,即給予明礬佐劑的SARS疫苗的動物,隨後又受到SARS-CoV的攻擊,表現出一種免疫病理性肺反應,這與嬰兒和動物模型中呼吸道合胞病毒(RSV)的描述相似,而給予RSV疫苗的動物模型則受到自然(嬰兒)或人工的攻擊(動物)有RSV[32],[33]。我們和其他人描述了在接種SARS-CoV疫苗並隨後攻擊SARS-CoV的小鼠中發生的類似免疫病理反應[18]、[20]、[21]、[28]。有人認為SARS-CoV的核衣殼蛋白是指導免疫病理反應的抗原[18],[21]。因此,從這些不同的觀察結果中,人們開始關注攜帶候選SARS-CoV疫苗的人類。”。,

2019-nCoV的病情進展與動物和人類接種SARS疫苗後再次感染的情況一致。因此,必須認真考慮2019年nCoV是實驗性疫苗類型的假設。


證據:INS1378與pShuttle冠狀病毒疫苗的序列同源性;蝙蝠冠狀病毒中存在SARS樣棘突蛋白,與蝙蝠冠狀病毒最相似;bootstrap值低。


反對證據:低序列同源性(但高度顯著)。這些病毒是RNA病毒,即使在實驗室條件下也能迅速進化。

狀態:很可能。


測試:測定中國正在研究的所有實驗室類型冠狀病毒的核苷酸序列(匹配將得到證實)。找到一個野生的與2019-nCoV相匹配的分離物,並可重複地從野生動物中獨立分離病毒(匹配會偽造)。


現有證據最有力地支持,2019-NCoV病毒是冠狀病毒的疫苗株,要麼是實驗室事故中意外釋放的,要麼是實驗室研究人員在進行動物實驗時感染了該病毒,要麼是中共正在進行冠狀病毒疫苗在人身上的臨床研究。


Dale Brown博士提請我注意報告了動物(大鼠、雪貂和猴子)嚴重免疫病理學的研究,在這些研究中,接種冠狀病毒疫苗的動物在隨後暴露於野生型冠狀病毒時,呼吸衰竭的發生率往往極高。

“注意在人類中應用SARS-CoV疫苗”-Te等人,2012Yasui等人(2012年)報告了接種SARS疫苗的小鼠的嚴重肺炎,這些小鼠隨後感染了SARS。


另一項關於雙重不活動SARS疫苗的研究發現,接種疫苗的小鼠,尤其是老年小鼠,嗜酸性粒細胞原炎症反應增強,寫道:


重要的是,老年動物肺部嗜酸細胞免疫病理學增強,對病毒複製沒有保護作用,如果中國政府一直在對非典進行人體試驗。MERS或其他使用重組病毒的冠狀病毒,在感染2019-nCoV冠狀病毒後,可能使其公民更易患急性呼吸窘迫綜合征。

其影響是顯而易見的:如果中國通過SARS疫苗使其人口變得敏感,而這是從實驗室逃出的,那麼世界其他地方就有嚴重的人道主義緊迫性來幫助中國,但可能不會像預期的那樣嚴重。


在最壞的情況下,如果疫苗株具有更高的傳染性和致死性,2019-nCoV可能成為人類歷史上疫苗衍生傳染病的最壞例子。由於前驅期為5-7天,從中國返回其他國家的個人必須直率和合作,在他們現在規定的2周檢疫期內。

引文
Lu,R等人,2020年。2019年新型冠狀病毒的基因組特徵和流行病學:對病毒起源和與柳葉刀結合的受體的影響。https://www.thelance.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736%2820%2930251-8/fulltext
Yasui等人,2012年。雙滅活嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒疫苗在小鼠中提供不完全保護,並在激發時誘導嗜酸性粒細胞增多性促炎性肺反應https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/pmc320347/
Te等人,2012年。SARS冠狀病毒疫苗的免疫導致肺部免疫病理學受到SARS病毒的挑戰。《公共科學圖書館•綜合》7(4)https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22536382
Yasui等人,嚴重急性呼吸綜合征(SARS)相關冠狀病毒(SARS-CoV)核衣殼蛋白的預先免疫可導致感染SARS-CoV的小鼠發生嚴重肺炎。免疫雜誌。181:6337-48 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18941225 https://www.jimminol.org/content/181/9/6337.long

Jason評:此文為病毒專家文章譯文,對於專業性術語,如有不妥,請各位移步原文鏈接,查看原文。本文涉及病毒學專業領域,外行人無權對內容發表質疑。但是,從內容看,對於病毒起源,國外專家已經做了大量的實驗,得到了科學上難以推翻的證據。那就是文中提到的選項4,這是一種在實驗室中為製造疫苗而產生的病毒!Jason自問,那麼,這種病毒是為了製造其他病毒的疫苗,那麼,針對這個病毒的疫苗呢?

原文鏈接

翻譯報道: Jason

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